成纤维细胞(自体成纤维细胞再生技术)

鸡成纤维细胞制备原理

用鸡胚制备培养鸡胚成纤维细胞。

实验材料9日龄鸡胚

试剂、试剂盒70%乙醇胰酶／EDTA无添加MEM培养基完全MEM-10培养基

仪器、耗材无菌解剖剪无菌镊子100cm2无菌培养皿10ml注射器无菌胰酶消化瓶（带磁力搅拌棒）CO2培养箱500ml烧杯纱布Sorvall离心机250ml离心管150cm2组织培养瓶

步骤

1.将10只9日龄鸡胚有空气部分朝上放置，喷上70%乙醇。

2.用无菌的解剖剪将鸡蛋的顶部打开，剪掉膜上蛋壳，使膜保持完整。用无菌镊子将膜取掉。其他鸡蛋亦重复相同操作。

3.取出鸡胚，放入无菌的100cm2培养皿。

4.剪掉每个鸡胚的头和足，将剩余的身体放入无菌的100cm2平皿中，加入10ml无添加剂的MEM培养基。通过10ml注射器（5个鸡胚/注射器）挤压，将鸡胚切碎并打人无菌的胰酶消化瓶中。

5.加入100ml37℃的胰酶/EDTA，并在加湿的5%CO2培养箱中37℃持续搅拌温育5min。

6.将液体从无菌胰酶消化瓶中倒人杯口带两层纱布的500ml烧杯，将过滤后的液体转移至250ml离心瓶中。

7.向含有剩余组织的无菌胰酶消化瓶中加入100ml新鲜的胰酶/EDTA，37℃温育。

8.将消化液倒入另一个杯口带两层纱布的500ml烧杯，并将过滤后的液体加入先前的250ml离心瓶中。

9.在SorvallRC-3B离心机中，4℃，1200g离心10min。

10.丢弃上清，加入10mlMEM-10完全培养基，反复抽吸10～15次重悬沉淀，并将体积调整至100ml。

11.将悬液转移至250ml离心瓶中，4℃，1200g离心10min。

12.用5mlMEM-10完全培养基重悬沉淀，并将体积调整至30ml。

13.将细胞悬液按每瓶1ml加入到30个含有30mlMEM-10完全培养基的150cm2组织培养瓶中。

14.37℃培养几天直至细胞长满，然后将培养瓶转移至加湿的5%CO2培养箱中31℃保存。

CEF细胞培养液能够在31℃保存2～3个星期。原代

成纤维细胞是什么

成纤维细胞又叫做纤维母细胞，是疏松结缔组织的主要细胞成分，属于终末分化细胞。

纤维母细胞是由胚胎间充质细胞分化而来的一种细胞组织，体积较大，轮廓清晰，有时也会呈不规则的卵圆形状，细胞核较大。纤维母细胞是功能以及活性较强的一种细胞，细胞核较大，能够产生胶原蛋白等蛋白质。由于其合成蛋白的功效以及分泌活性比较明显，在一定条件下能够与纤维细胞互相转化，所以在细胞变性、坏死以及组织缺损或者骨骼创伤修复中起着非常重要的作用。

绵羊成纤维细胞的特征

绵羊成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。

鸡胚成纤维细胞到底可不可以传代

可以传代.而且传代后形态要比原代时更好一点.原代杂细胞稍微多点.如果需要,有DF1,是CEF细胞系,但是不太好养,娇贵,都用10%的GIBCO血清养,而普通CEF用DMEM加国产血清就可以长很好.只要你原代细胞形态好,可以传1代是绝对没有问题的.如果细胞好可以传2代,但不建议传太多次,因为细胞本身没有多大分裂增殖能力.另外实验最好选在传细胞后24h内,这样细胞敏感性可能高一些.

体外培养时，儿童的成纤维细胞传代次数为什么会多于成人的成纤维细胞

传代次数越少表明这个细胞分裂过的次数越少，剩余的分裂次数越多。一个人的一个细胞分裂次数有限，大约50到60次左右，而小孩分裂的次数总体上来说肯定没有成人的多，也就是说分裂的没成人的多，剩余的分裂次数多